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　　大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　以下是關(guān)于大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合整理：

　　BS-2953  大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒

　　一、檢測原理

　　采用雙抗體夾心ELISA法：包被抗大鼠OxLDL抗體的微孔板中依次加入樣本和標準品，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，TMB顯色后顏色深淺與OxLDL濃度成正比。

　　二、試劑盒組成

　　主要組分?

　　預(yù)包被酶標板(96孔或48孔)

　　標準品(凍干粉或液體，含不同濃度梯度)

　　酶標抗體工作液(HRP標記)

　　顯色液(TMB A/B液)

　　終止液(硫酸溶液)

　　濃縮洗滌液(20×或30×)

　　保存條件?

　　未開封試劑盒需2-8℃保存，部分組分(如標準品)需-20℃凍存;開封后酶標板應(yīng)密封防潮。

　　三、樣本處理

　　樣本類型?：血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、組織勻漿或細胞上清液。

　　處理方法?：

　　血清/血漿：3000轉(zhuǎn)/分離心10-20分鐘去除顆粒物。

　　組織勻漿：生理鹽水勻漿后離心取上清。

　　稀釋要求：部分試劑盒需用配套稀釋液按1:1或1:2預(yù)稀釋。

　　四、實驗步驟

　　標準品配制?：凍干標準品需用稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋為5-7個濃度(如5ng/ml至75ng/ml)。

　　加樣與孵育?：

　　每孔加入50μl標準品或樣本，37℃孵育1小時。

　　洗滌3次后加入酶標抗體，再次孵育30分鐘。

　　顯色與終止?：

　　加入TMB顯色液避光反應(yīng)10分鐘，后加終止液變黃色。

　　檢測?：450nm波長測定OD值，空白孔調(diào)零。

　　五、結(jié)果計算

　　以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制標準曲線，樣本濃度通過曲線方程計算后乘以稀釋倍數(shù)。

　　注意：高濃度樣本可能需二次稀釋以保證線性范圍。

　　六、注意事項

　　避免反復(fù)凍融樣本，解凍后需混勻。

　　洗滌需，防止非特異性結(jié)合。

　　顯色時間需嚴格控制，避免過度反應(yīng)。

　　不同批次試劑盒組分不可混用。

　　七、局限性

　　濃度樣本(超過標準曲線范圍)需稀釋后重測。

　　注：以上資料僅供參考，僅限科研使用，不可用于臨床診斷。

　　如需具體操作細節(jié)，建議參考對應(yīng)試劑盒說明書(如48孔/96孔配置可能步驟略有差異)。

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